KỸ THUẬT ELISA TRONG CHĂN NUÔI THÚ Y
ELISA là gì?
ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) là một kỹ thuật được sử dụng để phát hiện sự hiện diện của một kháng thể hoặc kháng nguyên trong các mẫu sinh học bằng phản ứng miễn dịch đặc hiệu.
Trong đó, ELISA trực tiếp thường được sử dụng để phát hiện kháng nguyên (liên quan mầm bệnh). ELISA gián tiếp thường sử dụng để phát hiện/định lượng kháng thể dịch thể có trong mẫu huyết thanh.
Mẫu dùng cho ELISA trực tiếp có thể là huyết thanh, huyết tương, nước tiểu, dịch ly giải tế bào, dịch ly giải mô, nước bọt tuỳ theo hướng bài xuất của mầm bệnh, trong khi đó mẫu dùng phân tích ELISA gián tiếp yêu cầu là huyết thanh.
Nguyên tắc chung
Kỹ thuật ELISA dựa trên sự tương tác đặc hiệu giữa kháng nguyên (KN) và kháng thể (KT) kháng thể đã được gắn enzyme. Khi cho thêm cơ chất tương ứng (thường là nitrophenol phosphate) vào enzyme sẽ thủy phân cơ chất gây biến đổi màu cơ chất. Căn cứ vào mức độ đổi màu của cơ chất để đánh giá mức độ -/+ tính của phản ứng.
Các bước thực hiện kỹ thuật ELISA
Sơ đồ quy trình chung cho ELISA (mẫu huyết thanh và mẫu mô)
Những lưu ý khi thực hiện phản ứng ELISA
Chuẩn bị:
- Mang bộ kít từ tủ mát ra để ở nhiệt độ phòng 30 phút trước khi thực hiện
- Các ống eppendorf (huyết thanh) spin down nhẹ
Thao tác:
- Cho mẫu theo thứ tự đánh dấu ghi trên Bảng ELISA Test
- Khi cho diluent sample, trộn đều ít nhất 5 lần, không chạm đáy giếng
- Bước rửa không để đầu típ chạm dịch
- Hóa chất trước khi thêm vào đĩa phải lắc đều
- Cơ chất thêm vào đảm bảo giữ ở điều kiện tối
- Sau khi cho stop solution, đọc kết quả trong vòng 5 phút
- Khởi động máy đọc ELISA trước khi đọc kết quả ít nhất 5 phút
Kết quả:
Lưu file đã đọc trong máy theo thứ tự: Tên kít Hãng sản xuất ngày tháng năm. Ví dụ: PRRSVAB_Mien_20240712
Xử lý kết quả đọc trên excel, so sánh với màu của dung dịch để xem sự tương quan.
.jpg)
Phân tích kết quả xét nghiệm ELISA
1. Kết quả dương tính (đã loại bỏ dương tính giả)
Trong kỹ thuật ELISA, kết quả dương tính nghĩa là thú đã tiếp xúc với KN(đã lâu hoặc mới đây), do tiêm phòng hoặc cũng có thể do kháng thể mẹ truyền. Như vậy, dương tính không có nghĩa là đàn thú đang bị bệnh, do đó cần có thông tin về dịch tễ, quy trình chăn nuôi để đi đến kết luận cuối cùng.
2. Kết quả âm tính (đã loại bỏ âm tính giả)
Kết quả âm tính đưa ra nhiều giả thuyết như:
- Đàn thú chưa từng tiếp xúc với KN
- Đàn thú mới tiếp xúc với mầm bệnh gần đây (trong 5 ngày đầu sau khi gặp KN, cơ thể chưa có kháng thể)
- Đàn thú đã tiếp xúc KN quá lâu, và là loại KN có độ bảo hộ ngắn nên KT đã hết (IgM: mau hủy; IgG: lâu hủy)
Ứng dụng của ELISA
Khi nào phân tích ELISA tìm KN?
1. Kiểm tra sự lưu hành của virus/vi khuẩn, trực tiếp thông qua protein kháng nguyên trong mẫu
2. Khi thú mới nhiễm bệnh, chưa có kháng thể
3. Kiểm tra độc tố vi khuẩn
Khi nào phân tích ELISA tìm KT?
1. Kiểm tra đáp ứng miễn dịch sau tiêm phòng (PPV, PRRSV, PCV2, Giả dại, APP, HPS, Mycoplasma, E.coli, CSFV…)
2. Kiểm tra heo con nhận kháng thể qua sữa đầu
3. Kiểm tra sự lưu hành của virus/vi khuẩn, gián tiếp thông qua kháng thể
Đồng hành cùng với các kỹ thuật sinh học phân tử để phát hiện mầm bệnh kỹ thuật ELISA còn có thêm chức năng định tính và định lượng hàm lượng kháng thể giúp cho người chăn nuôi đánh giá được hiệu quả của việc tiêm phòng và đưa ra quyết định thời điểm nào tiêm nhắc lại là tốt nhất.
Không thể phủ nhận vai trò của kỹ thuật ELISA trong chăn nuôi thú y hiện nay. Khi quy mô và mật độ chăn nuôi ngày càng tăng, hoạt động tầm soát – giám sát các tác nhân gây bệnh càng cần được quan tâm.
R.E.P Biotech
Thông tin chuyên môn trong bài có tham khảo từ bài giảng "Chẩn đoán phòng thí nghiệm" của TS. BSTY. Đinh Xuân Phát
Bài viết liên quan:
Ứng dụng phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) để xét nghiệm kháng thể dịch thể trên động vật
Vai trò của các phương pháp xét nghiệm chẩn đoán bệnh trong chăn nuôi thú y
---------------------------------------
TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU - PHÂN TÍCH - XÉT NGHIỆM - TẦM SOÁT R.E.P
- 𝑵𝙝𝒂𝙣𝒉 𝒄𝙝𝒐́𝙣𝒈 - 𝑲𝙞̣𝒑 𝒕𝙝𝒐̛̀𝙞 - 𝙆𝒉𝙖́𝒄𝙝 𝙦𝒖𝙖𝒏 - 𝑩𝙖̉𝒐 𝒎𝙖̣̂𝒕 -
🏭 KCN Nhơn Trạch 3, đường Nguyễn Ái Quốc, TT. Hiệp Phước, Đồng Nai
📧 info@repbiotech.com
☎ 0327 615 454
Bài viết liên quan
-
HỘI CHỨNG GIẢM ĐẺ TRÊN GÀ VÀ GIẢI PHÁPTrứng là một nguồn thực phẩm bổ dưỡng và phổ biến. Sản lượng trứng năm 2024 đạt 20 tỷ quả, tăng 5% so với năm 2023, cho thấy sự tăng trưởng không ngừng của mảng chăn nuôi gà đẻ. Tuy nhiên Hội chứng giảm đẻ (Egg Drop Syndrome – EDS) do virus thuộc nhóm Adenovirus gây bệnh ở gà làm giảm khả năng sản xuất trứng.
-
ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP NGĂN TRỞ NGƯNG KẾT HỒNG CẦU (HI) ĐỂ XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ DỊCH THỂ TRÊN ĐỘNG VẬTHiện nay để đánh giá đáp ứng miễn dịch dịch thể cho động vật cần sử dụng đến các phương pháp như: trung hòa kháng thể; ELISA; ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI). Trong đó, phương pháp HI được xem là “tiêu chuẩn vàng” trong đánh giá miễn dịch chống lại các virus gây ngưng kết hồng cầu. Theo tiêu chuẩn quốc gia Việt Nam, phản ứng HI đã được chỉ định để chẩn đoán các bệnh do virus có khả năng gây ngưng kết hồng cầu thường gặp trên gia cầm như: Newcastle, Cúm gia cầm, và Hội chứng giảm đẻ (EDS) trên gà
-
HỆ QUẢ CỦA BỆNH KẾ PHÁT TỪ CIRCOVIRUS TRÊN VỊT VÀ PHƯƠNG ÁN KIỂM SOÁTVới vị thế là nước có đàn thủy cầm (chủ yếu là vịt) đứng thứ 2 thế giới, ngành chăn nuôi vịt ở nước ta phát triển với tốc độ đáng kinh ngạc. Nhiều giống vịt siêu trứng, siệu thịt được nhập vào nước ta, quy mô chăn nuôi ngày càng mở rộng, đi kèm với đó là sự bùng nổ các dịch bệnh. Trong những năm gần đây, người chăn nuôi trong cả nước phát hiện có một bệnh truyền nhiễm mới xuất hiện trên vịt thịt với biểu hiện còi cọc, rụng lông, gẫy lông gây giảm hiệu quả chăn nuôi. Bệnh đã chược chứng minh do Circovirus trên vịt hay bệnh Circo trên vịt (Circovirus in Duck) gây nên.
-
XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG KIỂM SOÁT BỆNH THIẾU MÁU DO MYCOPLASMA SUISTrong những năm gần đây, bệnh thiếu máu do vi khuẩn Mycoplasma suis ngày càng nhận được nhiều sự quan tâm của người chăn nuôi bởi những ảnh hưởng trực tiếp của bệnh đến năng suất sản xuất.
-
KHÁNG SINH ĐỒ ĐỊNH LƯỢNG – CÔNG CỤ SỬ DỤNG KHÁNG SINH CÓ KIỂM SOÁTNhững năm gần đây, nền chăn nuôi nước ta chuyển mình theo hướng quy mô và hiện đại hóa, áp dụng khoa học kỹ thuật và tự động vào quy trình chăn nuôi. Nhưng bên cạnh đó, chăn nuôi mật độ cao làm gia tăng áp lực mầm bệnh, lây lan nhanh các chủng kháng kháng sinh, gây khó khăn trong điều trị. Kháng sinh đồ định lượng được biết đến như một công cụ giúp nhà chăn nuôi sử dụng kháng sinh có kiểm soát và có hiệu quả.
-
VAI TRÒ CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN BỆNH TRONG CHĂN NUÔI THÚ YTrong tình hình dịch bệnh xảy ra hết sức phức tạp và biến đổi không ngừng, các phương pháp xét nghiệm chẩn đoán bệnh ngày càng có ý nghĩa quan trọng trong ngành chăn nuôi thú y. Do đó người làm việc trong ngành chăn nuôi thú y cần nắm được vai trò của các phương pháp này để đưa ra các quyết định phù hợp.
-
VẮC-XIN TRONG CHĂN NUÔI THÚ YTừ lâu vắc-xin đã đóng vai trò quan trọng trong ngành chăn nuôi thú y bởi ý nghĩa chủ động ngăn ngừa các bệnh do vi sinh vật gây ra, bảo vệ sức khỏe đàn vật nuôi. Do đó, việc hiểu để sử dụng đúng, phát huy hết tác dụng của vắc-xin là điều cần thiết.
-
KIỂM SOÁT TỐT BỆNH MAREK – LOẠI BỎ KẺ THÙ NGUY HIỂMBệnh Marek được biết đến từ lâu trong ngành chăn nuôi gà bởi những ảnh hưởng nặng nề mà bệnh này gây ra trên đàn gà. Khi đàn gà bắt đầu biểu hiện những triệu chứng của bệnh, thiệt hại là điều chắc chắn. Do đó nhà chăn nuôi cần kiểm soát tốt bệnh Marek – Loại bỏ kẻ thù nguy hiểm này khỏi trang trại.
Email
Gọi ngay
Kết nối zalo
MessengerĐăng ký nhận tin
Copyright © 2020 R.E.P Biotech JSC